Existuje mnoho spôsobov, ako merať rast baktérií, a jeden spôsob je komplikovanejší ako druhý. Aj keď niekedy je potrebné ignorovať konzistenciu merania, najľahší spôsob stačí na presné meranie rastu baktérií, takže sa často používa. Najbežnejšie používanými metódami je monitorovanie a počítanie baktérií, meranie suchej alebo mokrej hmoty a meranie úrovní zákalu/zákalu. Laboratórium vašej školy by malo mať nástroje a vybavenie potrebné na vykonanie aspoň jedného z týchto experimentov.
Krok
Metóda 1 z 3: Živé monitorovanie baktérií
Krok 1. Pripravte ingrediencie
Existuje mnoho špeciálnych nástrojov, ktoré je potrebné pripraviť a ktoré nemusia byť k dispozícii v biologickom laboratóriu. Pred spustením experimentu pripravte všetko vybavenie a kontajnery, aby počas procesu neboli žiadne problémy. Hneď budete musieť vedieť každú použitú zložku a základné pojmy z tohto experimentu.
- Pripravte počítaciu komoru. Má vstavanú komoru, sklo mikroskopu a mikroskop, takže je ľahké ho nastaviť a používať. Môžete si ho kúpiť v obchode s laboratórnymi alebo školskými potrebami. Tento nástroj by mal mať pokyny, ktoré vás prevedú celým procesom.
- Pripravte si nalievací pohár alebo roztierací pohár. Oba tieto kontajnery vám umožňujú monitorovať baktérie vo vnútri.
- Kultúra je termín používaný na opis rastu organizmov v experimente.
- Bujón je tekuté médium, v ktorom kultúra rastie.
Krok 2. Použite nalievaciu dosku alebo roztieranú dosku
Baktérie môžete tiež umiestniť priamo na misku na zobrazenie pomocou mikroskopu. Kultúru nalejte na tanier a umiestnite ju pod mikroskop. Monitorujte počet prítomných bakteriálnych buniek.
Krok 3. Uistite sa, že dávka koncentrácie je správna
Ak je ich priveľa, baktérie sa budú hromadiť jedna na druhú a môžete sa prepočítať. Kultúru zrieďte vmiešaním väčšieho množstva bujónu. Ak je ich príliš málo, výsledky výpočtu nebudú presné. Bujón precedíme pomocou filtračného systému.
Krok 4. Spočítajte baktérie
Posledným krokom je spočítanie baktérií po jednej. Pozrite sa na zväčšovaciu šošovku v počítacej komore a zapíšte si počet baktérií, ktoré vidíte. Porovnajte výsledky s výsledkami iných testov.
Metóda 2 z 3: Meranie suchej a mokrej hmotnosti
Krok 1. Uistite sa, že máte správne vybavenie
Táto metóda používa drahé vybavenie a veľa času. Ak vaše laboratórium nemá potrebné vybavenie, je vhodné použiť inú metódu. Ak je však vaše laboratórium dostatočne dobre vybavené, odporúčame túto metódu, pretože poskytuje konzistentnejšie výsledky. Pri tejto metóde budete potrebovať:
- Hydraulická gravitačná konvekčná rúra
- Vážiaci kontajner vyrobený z hliníka
- Sada baniek (laboratórne fľaše)
- Odstredivý stroj (odstredivka) alebo laboratórny filtračný systém
Krok 2. Uistite sa, že kultúra je vo fľaši
Pridajte kultúru k tekvici. V tejto fáze by kultúra mala byť vývarom, aj keď neskôr bude opäť oddelená.
Krok 3. Hliníkový vážiaci kontajner osušte v laboratórnej rúre
Namiesto toho môžete použiť filtračnú membránu z acetátu celulózy s priemerom 47 mm a veľkosťou pórov 0,45 µm. Bez ohľadu na to, akú nádobu na váženie použijete, odvážte ju, pretože bude musieť byť odpočítaná neskôr pri vážení bakteriálnych buniek.
Krok 4. Kultúru miešajte v banke, kým nie je rovnomerne premiešaná
Bunka sa vplyvom gravitácie prirodzene potopí a bude potrebné ju premiešať, aby sa rovnomerne rozložila v banke. Tak môžete mať viac vzoriek.
Krok 5. Odstredivkou oddeľte bakteriálne bunky od bujónu
Tento nástroj otáča bankou a rýchlo sa uvedie do rovnováhy, takže odteká vývar a ponechá kultúru v banke.
Krok 6. Na tekvicu zoškrabte pastu a vložte ju do nádoby na váženie
Vylejte vývar, pretože ho už nepotrebujete. Tekvice sa však ešte nezbavujte, pretože bude ešte použitá.
Krok 7. Vypláchnite odstredivý stroj a do nádoby nalejte oplachovú vodu
Na získanie mokrej hmotnosti nakvapkajte oplachovú vodu do banky na bakteriálne bunky.
Krok 8. Nájdite suchú hmotnosť
Na meranie suchej hmotnosti vložte nádobu do rúry a sušte pri 100 ° C po dobu 6 až 24 hodín podľa pokynov z rúry a/alebo použitej nádoby na váženie. Dbajte na to, aby teplota nebola príliš vysoká, aby sa baktérie nespálili. Po dokončení odvážte baktérie a nezabudnite výsledok znížiť o hmotnosť nádoby na váženie.
Metóda 3 z 3: Meranie zákalu
Krok 1. Pripravte si potrebné vybavenie
Budete potrebovať svetelný zdroj a spektrofotometer. Oboje je možné získať v obchodoch s laboratórnymi potrebami. Spektrofotometer by mal mať pokyny, ktoré vás prevedú používaním prístroja podľa modelu, ktorý máte. Cena spektrofotometra je pomerne dostupná a ľahko sa používa, takže sa môže stať jednou z najčastejšie používaných metód na meranie rastu baktérií.
Krok 2. Zapáľte vzorku
Podľa Laymanovho výrazu je zákal úrovňou zákalu vzorky. Musíte získať číslo merania zákalu, ktoré sa meria v NTU (Nefelometrická jednotka zákalu). Tento nástroj je potrebné kalibrovať, aby mohol presne merať vzorku.
Krok 3. Zaznamenajte výsledky
Zákal je ovplyvnený počtom baktérií vo vzorke. Spektrofotometer vám tiež povie percento prenosu (%T). Tento údaj sa zvýši, ak sa zákal zníži. Porovnajte výsledky s výsledkami iných testov na meranie rastu baktérií.
Pozor
- Pretože máte do činenia s kolóniou baktérií, urobte predbežné opatrenia tým, že budete používať ochranné vybavenie, ako sú ochranné okuliare a rukavice. Je tiež dobré nosiť masku, najmä ak nepoznáte typ skúmaných baktérií.
- Vykonajte predbežné opatrenia pred manipuláciou s akýmkoľvek druhom baktérií, dokonca aj neškodným. Pred začatím sa uistite, že sú všetky otvorené rany na vašom tele úplne zakryté.
